赵华文药业

 ZHAO  HUAWEN   MEDICINE

 

资

 

料

 

汇

 

编

 

湖南赵华文药业股份有限公司

二0一九年一月

 赵华文百宝丹源自三国时期行军打仗的救急良方“行军散”，临床上，行军散外用可治疗口舌生疮，咽喉肿痛等症，临床表现为口腔溃疡，急性扁桃体炎，咽炎等属于热毒证者，外搽本药，具有较好的疗效，同时，还可用于治疗又可用于预防夏季中暑。夏季中暑，临床症见头晕目眩，烦躁，神昏，腹痛吐泻或过食生冷食物引起的急性肠胃炎，以及水土不服和轻度食物中毒等症，用之为宜。
“行军散”治病又防病，从行军打仗的战场中流传到民间，千百年来此方久兴不衰。老中医赵华文祖上几代均用“行军散”为人治病，在赵华文先生小的时候，父亲经常带他上山采一些草药配成方子为老百姓治疗口疮、烧烫伤、外伤、疮疡、腹泻等，而且一治一个准，受父亲的影响，他爱上了中草药。在他16岁那年父亲给了一本（赵氏祖传秘笈），并告诉他：“这本秘笈载有赵氏先祖赵子龙行军打仗防身救命的“行军散”，有神效，一定要好好学习深入钻研，将其发扬光大”。为了研究“行军散”，赵华文先生广猎中医药书籍，经过反复对比，发觉自己手中的赵氏祖传“行军散”秘本与民间传承下来的“诸葛行军散”秘方有一些区别，赵华文先生手中的“行军散”秘本由金银花、白芨、三七、冰片、土大黄、蟾酥、珍珠、麝香、人中白、龙齿、僵蚕、朱砂、硼砂、寒水石、枯矾、雄黄、犀牛黄、硝石、飞金等十九味药组成。该处方相较于诸葛行军散而言有强大的抗抑菌作用，更适应于行军途中的水土不服、腹痛腹泻等肠道疾病，可能是出于战争保密需要对秘方进行了隐省，也可能是赵氏先人在实践过程中加以完善而成，可惜战火频仍，历经千年变乱，这其中的种种变故已经无从考起。
在五十年的漫长岁月中，赵先生对“行军散”中每一味药材进行了考证，并以身试药，一次次改良，一次次创新，终于确定了赵华文百宝丹配方，配方组成以道地药材金不换、金银花、虎杖、白芨、疡见愁为主要原料。其中，金不换，祛风明目、清热解毒、消肿止痛；金银花，抑菌、清热解毒；白芨，收敛、生肌、止血、消炎作用，因其含有60%的白芨胶质，可在溃疡面上形成一层胶状保护膜，同时刺激肉芽组织增生，促进溃疡面的愈合；疡见愁，广谱抗菌、收湿解毒、化腐生肌、收敛；虎杖，清热解毒、抗菌、抗病毒及镇咳平喘、常用来治疗复发性口腔溃疡、急性炎症、烧烫伤，根据临床疗效观察虎杖烫伤液对金黄色葡萄球菌 ,大肠杆菌 ,铜绿假单胞菌抑菌作用较强。
百宝丹是传承千年的非物质文化遗产，经由老中医赵华文先生潜心50年的研制，祛除了赵氏祖传秘方中低效、有毒成份，吸取并增添无毒、高效之精华，利用现代高新医药技术研制而成，临床应用发现其具有清热解毒、收湿健脾、化腐生肌、通利血脉的功效，内服能快速增强人体免疫系统功能、消除非特异性炎症；外用适用于金疮、外伤、溃疡、烧伤、烫伤、褥疮之创面，既能快速止血镇痛，又能深层抑菌消炎、化腐生肌促进创面愈合，疗效显著，填补了医学界多项空白。

目 录

 

卷首语/序言（权威题字）                

第一章 百宝丹秘方来源、传承

（一）赵云与百宝丹的故事（已有，需完善）

（二）百宝丹传承过程的故事

（赵云行军散如何传承到赵华文家族的过程，以及在此过程中的典型案例、故事）

（三）赵华文炼百宝丹的故事

（赵华文实践成就百宝丹的历程、典型故事）

第二章  百宝丹秘方科学性分析

（一）百宝丹学术论文或专家、教授评价（侧重药理、毒理）

（二）赵华文自述评价报告

（从传统中医的角度进行组方分析）

（三）百宝丹专利申报相关资料

第三章 百宝丹的典型应用案例

第四章 百宝丹未来发展展望

（一）百宝丹未来五年发展规划及展望

（二）国家相关政策文件

第五章 百宝丹附件资料

（一）湖南省疾控中心检验报告

（二）湖南省消毒产品备案报告

（三）企业标准

 

 

 

第一章  公司简介

 

弘扬中医文化  造福人类健康

——湖南赵华文药业股份有限公司简介

 

湖南赵华文药业股份有限公司成立于2015年11月，办公地址：岳阳经开区电商服务中心11楼（岳阳大道连接线四公里处），经过近三年的艰苦创业，公司发展成集中药材种植加工、中医药秘方研发、生产及销售为一体的现代化高科技企业，为实现中药秘方现代化、产业化发展，公司借助资本运营的工具和手段，公司顺利完成股份制改造，并成功登陆湖南省股权交易所挂牌，股权代码：800113HN。

公司的核心竞争力是传承千年的行军打仗急救古方--“赵华文百宝丹”，产品具有应急与防护两大特点，居家、外出时的意外受伤，工作、旅行时的常见病痛都可以快速有效解决，产品属于纯中药制剂，无任何毒副作用。

“赵华文百宝丹”中药验方源自千年行军打仗急救古方“行军散”，祛除了赵氏祖传古方中低效、有毒成份，吸取并增添无毒、高效之精华，利用现代高新医药技术研制而成，临床应用发现其具有清热解毒、收湿健脾、化腐生肌、通利血脉的功效，内服能快速增强人体免疫系统功能、消除非特异性炎症；外用适用于金疮、外伤、溃疡、烧伤、烫伤、褥疮之创面，既能快速止血镇痛，又能深层抑菌消炎、化腐生肌促进创面愈合，疗效显著，填补了医学界多项空白。

我国现在正处于社会发展转型时期，公共安全形势依然严峻，重大自然灾害、事故灾难、公共卫生和社会安全事件等突发事件时有发生，这严重威胁着社会和经济的健康发展。从统计数据上看，全国每年因自然灾害、突发公共事件及交通事故造成的损失达4000亿元以上，个人外出工作旅行遇到的意外伤害损失更是无法统计。

根据现代急救医学理论，意外事故发生后的4-30分钟，对于挽救生命非常重要，被称为“黄金4分钟”。如果在意外发生的第一时间采取有效的现场急救手段，就可以最大限度挽救生命或减轻伤残程度。在施救过程中，专业急救用品的存在和急救技能的掌握显得尤为重要。

“赵华文百宝丹”源自千年行军打仗急救古方“行军散”，依据现代应急救护特点利用现代制剂技术研制而成，强化快速止血镇痛、强效抑菌消炎、化腐生肌促进创面愈合的应急救护效果，可以充分利用“黄金4分钟”。居家、外出时的意外受伤，工作、旅行时的常见病痛更可以快速有效解决。

急救产业是典型的蓝海产业，伴随着人民生活水平的不断提高，国家突发安全事件应对机制的不断发展，以及网络时代海量信息的广泛传播，防灾应急的意识以及方法为越来越多的民众所接受，民众的自救互救意识不断提升。根据工信部的统计，预计全国用于人员救治的急救产业市场超过1000亿元。“赵华文百宝丹”产品持有人——湖南赵华文药业股份有限公司致力于拓展急救产业市场，以“应急救护、居旅必备”为市场定位，打造“赵华文百宝丹”品牌系列产品，为社会持续提供优质的现代应急救护产品。

我们努力传播自救互救防身技能和日常防护知识，鼓励人们储备有备无患的应急救护产品，只为保护更多的生命，帮助人们在危险的时候转危为安，在需要的时候排忧解难。生命仅有一次，我们随时随地都在与变幻多端的灾害环境和突发事故灾难做最大的斗争，每时每刻都在为您的安全防护做最大的努力。

    公司长期致力于民用应急救护产品研究和开发，我们围绕“保护、支持和拯救生命”的企业宗旨，不断进行完善与改进，使其能够满足不同行业、不同人群、不同意外伤害的应急救护需求。适合于家庭、车辆、机关团体、企业、学校、公共场所等地方配备，让保护无处不在！无论是专业应急救护、家庭自用、企业安全生产应急救护、员工职业健康福利，还是金融、保险、通讯、红会、关工委等系统领域作为礼品都非常适宜。

我们推崇“保护生命 助您平安”的产品价值观，践行“把关爱献给每一个人，把安全送进每一个家庭”的企业责任。我们真诚欢迎社会各界人士与我们一起致力于安全应急救护朝阳产业的发展，欢迎各级企事业单位来电洽谈应安全急救护产品采购，我们将以高效一流的服务满足您个性化的需求！

 

 

 

 

 

 

▲公司营业执照

▲股改挂牌通知书

▲赵华文百宝丹5类注册商标

▲赵华文百宝丹5类注册商标

▲赵华文百宝丹10类注册商标

▲予草清5类注册商标

第一章 产品介绍

 

赵华文药业自2015年11月注册成立以来，依托“赵子龙行军散”祖传秘方，开发出了应急救护、口腔健康护理、专科护理三个系列11款产品。

其中，应急救护系列产品主要特点为：快速止血镇痛、强效抑菌消炎、化腐生肌促进创面愈合，居家、外出时的意外受伤，工作、旅行时的常见病痛可以快速有效解决，主要面向全国第三终端进行销售。

口腔健康护理产品特点为：清热解毒，消除口腔炎症；化腐生肌，促进创面愈合；修复黏膜，强力凝固创面蛋白质，迅速止痛止血；收湿健脾，调节人体免疫功能，恢复整体平衡。主要面向线上渠道进行销售。

专科护理产品主要分为：儿童皮肤凝胶、**皮肤凝胶、妇科冷敷凝胶、肛泰冷敷凝胶4款产品，产品主要定位为医院器械耗材类产品，主要面向所有医院进行使用。

产品于2018年3月成功中标了岳阳医疗卫生机构医用耗材集中采购项目，目前已经在岳阳市三五一七职工医院、长沙市岳麓区观沙岭社区卫生中心进行临床观察。后期会参与到各省市区的医疗机构招标推广。

 

 

 

 

 

 

 

赵华文药业主要产品及用途

 

 

 

 

 

 

 

赵华文百宝丹

——源自千年行军古方的现代应急救护“常备药”

 

★全国每年因自然灾害、突发公共事件及交通事故造成的损失超过4000亿元，个人外出工作旅行遇到的意外伤害损失更是无法统计。

根据现代急救医学理论，意外事故发生后的4-30分钟，对于挽救生命非常重要，被称为“黄金4分钟”。如果在意外发生的第一时间采取有效的现场急救手段，就可以最大限度挽救生命或减轻伤残程度。在施救过程中，专业急救用品的存在和急救技能的掌握显得尤为重要。

★“赵华文百宝丹”源自千年行军打仗急救古方“行军散”，依据现代应急救护特点利用现代制剂技术研制而成，强化快速止血镇痛、强效抑菌消炎、化腐生肌促进创面愈合的应急救护效果，可以充分利用“黄金4分钟”。居家、外出时的意外受伤，工作、旅行时的常见病痛更可以快速有效解决。

★根据工信部的统计，预计全国用于人员救治的急救产业市场超过1000亿元。“赵华文百宝丹”产品持有人——湖南赵华文药业股份有限公司成立于2015年11月，注册资金200万元，是一家集中药材种植加工、中医药秘方研发、生产及销售为一体的现代化高科技企业。2018年12月成功登陆湖南省股权交易所挂牌，股权代码：800113HN。公司致力于拓展急救产业市场，以“应急救护、居旅必备”为市场定位，打造“赵华文百宝丹”品牌系列产品，为社会持续提供优质的现代应急救护产品。

 

 

 

 

 

 

 

第二章  产品研发情况

 

赵华文药业的核心竞争力是传承千年的行军打仗急救古方--“赵华文百宝丹”，产品具有应急与防护两大特点，居家、外出时的意外受伤，工作、旅行时的常见病痛都可以快速有效解决，产品属于纯中药制剂，无任何毒副作用。

“赵华文百宝丹”产品及专利的研发工作始于1965年，结束于2015年，产品研发人赵华文先生依托传承千年的祖传秘方“行军散”，不断进行临床实践，从疮疡科开始研究，跨越了烧伤科、外伤科、口腔科、耳鼻喉科、皮肤科、肛肠科、妇科、男科、儿科等十个专业科室，历数千次尝试，历经50年的临床实践，祛除了赵氏祖传古方中低效、有毒成份，吸取并增添无毒、高效之精华，利用现代高新医药技术研制而成，临床应用发现其具有清热解毒、收湿健脾、化腐生肌、通利血脉的功效，内服能快速增强人体免疫系统功能、消除非特异性炎症；外用适用于金疮、外伤、溃疡、烧伤、烫伤、褥疮之创面，既能快速止血镇痛，又能深层抑菌消炎、化腐生肌促进创面愈合，疗效显著，填补了医学界多项空白。

“赵华文百宝丹”属纯中药制剂，无毒副作用，无任何市场风险，该产品老少皆宜，2017年10月公司送交产品样品到湖南省疾病预防控制中心先后进行了长达五个月的消毒试验、毒理试验、理化试验观察，经检验产品各项检验全部合格，符合《中华人民共和国卫生部标准》、消毒产品技术规范。

公司于2016年正式申请了发明专利，获得了中华人民共和国国家知识产权局受理通知书，专利申请号码为201610862830.4，于2016年11月21日获得了发明专利申请初步审查合格通知书，目前正在进行发明专利实质审查，与此同时，公司申请了8项实用新型专利，已经获得授权，目前公司正在积极申报湖南省高新技术企业称号。

为进一步了解“赵华文百宝丹”发挥药效作用的物质基础、药效作用及药物安全性，公司组建了以李然博士、徐长琼博士为核心的研发团队，于2019年1月8日与汕头大学医学院签订产学研合作协议，拟对赵华文百宝丹中药秘方进行药学、药效学、毒理学等研究，实现赵华文百宝丹安全、有效，生产工艺合理可行，制剂质量稳定可控的指标。 

 本课题在研期间还可以直接向设立在珠海横琴新区的粤澳合作中医科技产业园申请孵化场地，利用粤澳合作中医科技产业园的优质资源面向沿海地区寻找战略合作伙伴引进资金投入，设立公司分支机构，深入开展“赵华文百宝丹”中药六类新药国药准字号的研发申报工作，为公司的后续发展打下坚实基础。

“赵华文百宝丹”未来还可以应用于口腔健康护理、护肤、胃肠道疾病治疗等方面，未来可能产生的收益与价值是不可限量，不可预估的。

 

 

 

 

 

 

 

百味人生炼宝丹

----赵华文百宝丹中药秘方研发人赵华文事迹材料

 

不忘初心 传承古方

在湘北大地的药姑山上，人们经常会发现一个年轻又帅气的小伙背着一个采药框，弯着身子仔细地寻找他所需要的天然中药。他就是赵华文百宝丹中药秘方研发人--赵华文先生，那年他才22岁，他就是赵子龙的嫡系子孙，一个珍藏千年秘方的传承者。

赵云：字子龙，常山真定人氏，白袍银甲，白马银枪身长八尺，身姿雄伟，三国时期蜀汉名将。相传，赵云的枪法学自三国时期武术名家童渊。童渊晚年隐居深山，后经赵云慕名三次求拜，以诚心感动童渊并收了赵云为关门弟子，经寒暑十载苦学终有大成，赵云学艺期间得恩师指点自创了一套“七探蛇盘枪”，颇得恩师童渊赏识。赵云艺成下山之前，童渊将毕生研究之秘方“行军散”赠与赵云，并嘱赵云“此乃神药行军散，可保尔等日后大成”。

赵云下山后，初战成名于公孙赞与袁绍的战役，其后赵云跟随刘备入蜀，蜀军连年征战，军中缺医少药，赵云遂献出“行军散”秘方，经丞相诸葛亮验证、监制，分发军中使用，后在长年行军打仗的过程中，蜀军屡得“行军散”之助，因其药能治水土不服、泻泄、痢疾、避暑避瘟，保证军士战胜瘴气疫疠，亦可治刀、箭、棒伤，痈疽疮疡、口疾、虎犬蛇虫咬伤、蜂蝎蛰伤。使军队无病疫之忧，将士们个个身强体壮、士气高昂，勇猛地战斗，在其先后参加的博望坡之战、长坂坡之战、江南平定战，独自指挥过入川之战、汉水之战、箕谷之战，都取得了非常好的战果。被世人俗称其为常胜将军。

赵华文祖上几代均用“行军散”为人治病，在赵华文先生小的时候，父亲经常带他上山采一些草药配成方子为老百姓治疗口疮、烧烫伤、外伤、疮疡、腹泻等，而且一治一个准，受父亲的影响，他爱上了中草药。在他16岁那年父亲给了一本（赵氏祖传秘笈），并告诉他：“这本秘笈载有赵氏先祖赵子龙行军打仗防身救命的“行军散”，有神效，一定要好好学习深入钻研，将其发扬光大”。1963年赵先生带着秘笈，带着梦想应招进入医院学习中医（师承曹光裕、黄炳生），而后进修于临湘卫校、省中医学习班、湖南汉寿血防中医班，获益匪浅，为赵华文百宝丹中药秘方即“行军散”的研制奠定了扎实的理论基础。

 

 

工匠精神 铸造品质

为了研究“行军散”，赵华文先生广猎中医药书籍，经过反复对比，发觉自己手中的赵氏祖传“行军散”秘本与民间传承下来的“诸葛行军散”秘方有一些区别，诸葛行军散主要是犀牛黄、麝香、珍珠、冰片、硼砂、雄黄、硝石、飞金等八味药组成。

而赵华文先生手中的“行军散”秘本则主要由金银花、白芨、三七、冰片、土大黄、蟾酥、珍珠、麝香、人中白、龙齿、僵蚕、朱砂、硼砂、寒水石、枯矾、雄黄、犀牛黄、硝石、飞金等十九味药组成。

该处方相较于诸葛行军散而言有强大的抗抑菌作用，更适应于行军途中的水土不服、腹痛腹泻等肠道疾病，可能是出于战争保密需要对秘方进行了隐省，也可能是赵氏先人在实践过程中加以完善而成，可惜战火频仍，历经千年变乱，这其中的种种变故已经无从考起。

在五十年的漫长岁月中，赵先生对“行军散”中每一味药材进行了考证，并以身试药。俗话说，良药苦口利于病。赵医师先从老祖宗传承下来的配方亲口品尝起牛黄、麝香、薄荷.......一味一味，苦涩难咽，效果却并不理想。于是扛起锄头，背上背篓上山采药，湖南的药姑山、五尖山，西岳华山，四川峨眉山、神农架都有他的足迹。赵先生常常上山采药、尝药，艰辛的采药过程令他几死几生，蛇虫咬了扯一把草药口中嚼嚼敷上，中毒了躺在地上睡睡又起来，掉下悬崖爬出荆棘又前行。功夫不负有心人，一个偶然的机会，他发现了一种树，收集了各个部分的根、皮、树叶研究，发现在树叶两叶一心时止血止疼的效果最佳。这为百味丹的研制带来一丝曙光。赵先生从浩瀚的中医古方中，一张一张寻找灵感，加以借鉴，日以继夜，废寝忘食，一次次改良，一次次创新，终于确定了百宝丹的基本配方，最终，源自于传承千年“行军散”秘方的赵华文百宝丹配方得以诞生，赵华文百宝丹祛除了赵氏祖传秘方中低效、有毒成份，吸取并增添无毒、高效之精华，百宝丹配方由女贞叶、金银花、金不换、疡见愁、虎杖、三七、枯矾、寒水石、白及、珍珠粉、冰片、薄荷脑和麝香十三味道地中药组成。

配方确定后，赵先生开始了熬制，精炼，完善制作工艺过程。为了寻找到适合熬制的器具，他风餐露宿，试了好几种才成功。此外，他还要面对配套厂家的问题。一次，由于配套厂家提供的原料不合格，导致辛苦熬制的一锅药剂全部报废，这让他心疼不已！但并没有阻止前进的步伐。

当赵华文百宝丹成品出来后，赵先生免费给周围的乡亲们试用，反馈信息，完善产品质量。呕心沥血，默默奉献，经过反复的完善改良，源自于传承千年“行军散”秘方的赵华文百宝丹终于炼制成功了！百宝丹用中医的办法解决了当代没有解决的许多常见病、多发病问题，攻克了许多顽固性疑难杂症，百宝丹的问世，将对人们的健康及社会经济的发展起到很好的促进作用。

 

古稀之年 艰苦创业

为弘扬中医国粹、造福人类健康，72岁高龄的赵先生以中药秘方入股与投资人丁新香女士于2015年11月共同创立湖南赵华文药业有限公司，因为产品及未来市场前景巨大，2016年11月受邀进入岳阳经开区电商服务中心进行企业孵化。

开弓没有回头箭，公司成立后，找场地、报资料、筹资金、招人才、开拓市场，桩桩件件赵先生都亲力亲为。累了，歇歇脚，喘口气，再起身；痛了，咬咬牙，擦干泪，再前行。赵先生凭借强烈的事业心和泰山压顶不弯腰的精神，终于苦尽甘来。产品于2016年2月1日获得国家批文正式批量生产面向市场推广，目前形成了抑菌粉，抑菌液油剂，抑菌液喷雾剂系列产品，昔日的珍藏秘方，如今已成为了人们喜爱的居家旅行必备良品。由于产品会说话，一传十，十传百，百宝丹已经走进了十多个省市、走出了国门，已经让千万个家庭成为了产品的受益者。

以振兴中医为己任，并将其发扬光大！72岁高龄的赵先生放弃子女提供的优越生活条件，白手起家，艰苦创业。赵先生常说，不研制出百宝丹，他死不瞑目。这不仅是他自己的雄心壮志，更是他作为一个中医传承人肩负的神圣使命。

赵先生相信在社会各界朋友的关心支持下，在国家大力支持中医药发展政策的鼓励下，赵华文百宝丹产品将沿着一带一路走出国门，跨向世界，惠及更多的家庭。

 

 

 

 

 

 

 

 

▲公司发明专利

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

▲等待发证书的实用新型专利

 

▲等待发证书的实用新型专利

 

▲等待发证书的实用新型专利

 

▲等待发证书的实用新型专利

 

▲等待发证书的实用新型专利

 

▲等待发证书的实用新型专利

▲等待发证书的实用新型专利

▲已经授权的实用新型专利

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

湖南赵华文药业研发计划

(2019-2020)

 

 

 

 

 

 

 

项目名称：	“赵华文百宝丹”药效作用、药效物质基础及作用机制研究
项目负责人：	徐长琼、李然		联系电话：	13412882812
项目联系人：	方淼		联系电话：	13397508777
起止时间:	2019年2月15日—2020年8月15日

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

一、目的意义

口腔溃疡属于一种非特异炎症，复发性、疼痛性、局限性溃疡为其主要临床特点，阻碍进食、睡眠，严重影响患者生活质量。赵华文百宝丹中药秘方源自千年古方“行军散”，临床应用发现其具有清热解毒、收湿健脾、化腐生肌、通利血脉的功效，内服能快速增强人体免疫系统功能、消除非特异性炎症；外用适用于金疮、外伤、溃疡、烧伤、烫伤、褥疮之创面，既能快速止血镇痛，又能深层抑菌消炎、化腐生肌促进创面愈合，疗效显著。方药组成以湖南省地产白芨、虎杖为主要原料。中药白芨，具有收敛、生肌、止血、消炎作用，因其含有60%的白芨胶质，可在溃疡面上形成一层胶状保护膜，同时刺激肉芽组织增生，促进溃疡面的愈合。中药虎杖，味苦、性微寒，清热解毒，主要药理作用有抗菌、抗病毒及镇咳平喘、常用来治疗复发性口腔溃疡、急性炎症、烧烫伤、肝炎、气管炎等疾病效果显著，根据临床疗效观察虎杖烫伤液对金黄色葡萄球菌 ,大肠杆菌 ,铜绿假单胞菌抑菌作用较强。其中虎杖有效成份为黄酮类及综合型鞣质, 具活血化瘀,止痛 ,收敛的功效。此药对中、小面积烧伤有明显的止痛消炎、收敛、防腐、促进上皮生长，减少烧伤后疤痕增生的特点,为治疗中小面积烧伤的理想外用药物。

然而其有效物质及作用机制不明，缺乏其临床应用的说服力，按照《中药新药研究的技术要求》，拟对赵华文百宝丹中药秘方进行药学、药效学、毒理学等研究，实现赵华文百宝丹安全、有效，生产工艺合理可行，制剂质量稳定可控的指标。新药的安全性和有效性是最根本的要求，而药效作用的发挥离不开物质基础，因此，本研究团队将采用高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术对“赵华文百宝丹”进行药效物质基础研究，了解其主要成分，根据文献，了解此类成分主要药效作用及安全性，进而进行药效学和安全性研究，并在此基础上建立口腔溃疡动物模型实验进一步观察其有效性及进行作用机制研究。了解“赵华文百宝丹”发挥药效作用的物质基础、药效作用及药物安全性，为临床前期应用赵华文百宝丹治疗口腔溃疡提供科学依据。

二、研究目标

1、基于液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS），结合标准品分析“赵华文百宝丹”发挥药效作用的物质基础。

2、在物质基础研究基础上，对“赵华文百宝丹”药物有效检测指标进行动物实验研究，为“赵华文百宝丹”提供临床前药效学研究。

3、对“赵华文百宝丹”毒副作用进行动物实验研究，对其安全性评价，提供科研数据。 

4、为其制剂开发、专利开发申请及市场化提供可靠科学研究数据。

5、研究数据总结，发表2-3篇“赵华文百宝丹”相关实验科学研究论文。

三、研究内容

1、本项目拟在中医药理论基础上，结合现代分析方法，通过LC-MS（液质联用）分析了解“赵华文百宝丹”发挥药效作用的物质基础。

2、通过建立口腔溃疡大鼠模型，观察药后大鼠溃疡面积及创面愈合率；溃疡表面感染情况分级；HE染色法观察用药后炎细胞浸润情况、坏死组织；酶联免疫吸附法ELISA法检测血清炎性因子（EGF_{（EGF水平下降，溃疡部位愈合程度更高}）、ET-1、IL-1、IL-8、TNF-a）含量；Western-blot检测肉芽组织中MMP-2、MMP-9蛋白的表达；检测免疫球蛋白IgA、IgG变化情况；血小板**，综合评价“赵华文百宝丹”对口腔溃疡模型大鼠抗炎、促进创面愈合、提高免疫力与改善微循环的药效作用，以验证“赵华文百宝丹”的清热解毒、化腐生肌、收湿健脾、通利血脉的作用。

3、通过建立基础机械痛、热痛、冷痛、刺激痛等疼痛小鼠模型，测试小鼠基础机械痛、热痛、冷痛痛阈值，验证其止痛作用。对使用“赵华文百宝丹”后小鼠痛阈值、创面结痂面积及脱痂愈合时间进行测定，明确“赵华文百宝丹”止血镇痛、化腐生肌药效作用；并通过免疫组化检测口腔粘膜组织中c-Fos蛋白表达，综合评价“赵华文百宝丹”的消炎镇痛作用。

4、通过“赵华文百宝丹”对小鼠急性毒性试验、血常规、肝、脾、肾功能的检测及HE染色法，对其制剂安全性进行评价。

四、拟解决的关键科学问题

1. 高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术

通过对“赵华文百宝丹”方药配伍进行分析，预测其可能主要成分，根据LC-MS测得各主要成分峰的分子离子峰了解其分子量信息，对方药组成进行文献检索，预测可能成分，购买标准品进行验证，明确其药物物质基础。

2. 动物模型构建技术及抗炎镇痛药效、药物安全性评价方法

通过口腔溃疡大鼠模型、疼痛模型、急性炎症模型，热板实验、扭体实验、急性疼痛模型及各炎性因子、免疫因子、应激因子等综合评价其清热解毒、收湿健脾、化腐生肌、通利血脉药效作用；通过“赵华文百宝丹”对小鼠急性毒性试验，验证制剂安全性，各种建模方法已掌握。

3.各种实验技术方法的掌握

本课题涉及多种实验技术，如ELISA、免疫组化、HE染色、蛋白印迹等，这些关键问题本实验团队已掌握。

五、技术路线图

六、研究方法

第一部分：“赵华文百宝丹”的药效物质基础分析

1、LC-MS分析“赵华文百宝丹”的药效物质基础

对“赵华文百宝丹”醇浸出液进行高效液相色谱法（HPLC）全波长扫描，选定色谱条件；根据方药配伍和文献，查阅每个方药主要成分，结合LC-MS测得的分子离子峰信息，预测主要化学成分；购买标准品制标准品溶液，参考《中国药典》（2015年版·四部）（通则0512）使用HPLC在选定色谱条件下进行验证，分析得到发挥药效作用的物质基础。

第二部分：“赵华文百宝丹”实验用药和阳性对照药的制备

1、实验药物、对照药物的制备

根据方药具体组成，再确定直接用散剂还是制备药膜。

1.1“赵华文百宝丹”药膜制备

取赵华文百宝丹、Tween-80、甘油适量，加饱和羟丙基纤维素液，50℃水浴加热，玻璃棒搅拌至充分溶解成凝胶状，静置24h后均匀铺盘，待干后将其切成直径1cm的药膜贴，紫外线照射消毒，聚乙烯薄膜密封备用。

1.2空白对照组—生理盐水药膜制备

取氯化钠9g，加饱和羟丙甲基纤维素液到1000ml，其余方法同上。

1.3阳性对照组——冰硼散药膜制备

取冰硼散、Tween-80、甘油适量，加饱和羟丙基纤维素液，50℃水浴加热，玻璃棒搅拌至充分溶解成凝胶状，静置24h后均匀铺盘，待干后将其切成直径1cm的药膜贴，紫外线照射消毒，聚乙烯薄膜密封备用。

第三部分：“赵华文百宝丹”对动物模型药效作用及机制研究

1、对冰醋酸所致SD大鼠口腔溃疡的作用

1.1造模、分组及给药：SD大鼠45只，体重180g左右，雌雄各半，适应性饲养1周后，除空白组9只外，其它组按大鼠体重给予异氟烷麻醉，大鼠麻醉后取6cm长的玻璃管，下端直径为60mm，内置一小棉球，使小棉球的底部与玻璃管下口齐平，然后在管内滴入90%冰乙酸溶液至刚浸透小棉球为止。再将此玻璃管下端平置于大鼠右侧口角内的颊黏膜上，烧灼90s后，即见该区黏膜出现大面积不规则的白色损害，24h后大鼠两颊实验区形成直径60-100mm的圆形或椭圆形溃疡，表面有灰白色假膜覆盖，部分腐烂严重，制成大鼠口腔溃疡模型。（成功标准：黏膜上皮破损或糜烂，大量炎细胞浸润）。

取第2天造膜成功的大鼠36只，随机分为4组，模型组、阳性对照组、赵华文百宝丹低剂量组、赵华文百宝丹高剂量组，每组9只。赵华文百宝丹低剂量组与赵华文百宝丹高剂量组每天上午及下午各药一次，直接喷洒于患处。空白组和模型组每天给予同体积的面粉喷敷，模型组每天上午及下午予冰硼散外敷一次。连续给药7天。

1.2指标检测：

①溃疡面积及创面愈合率

记录溃疡大小，第一天给药前，用游标卡尺测量溃疡面直径（cm），连续给药7天，并于用药后每天对大鼠创面进行平面拍照，用游标卡尺测量大鼠的溃疡面直径，计算溃疡面积及创面愈合率

溃疡愈合率=（原始溃疡面积-各时间点未愈合面积）/原始溃疡面积*100%

②溃疡表面感染情况分级：0级，肉眼观察溃疡恢复至正常状态；I级：表面无明显假膜；II级，溃疡表面有薄层黄白色假膜，周围无水肿；III级，溃疡表面假膜较厚，且周围伴有炎性水肿。

③ HE染色切片检测组织的炎症细胞、血管数目，上皮增生情况（上皮细胞核碎裂、固缩、深染），观察用药后炎细胞浸润情况、坏死组织、边缘纤维细胞增生情况、癒痕组织形成天数。

给药后第3、5、7天，各组随机选取1只大鼠颈部脱臼法处死，以眼科剪剪下0.5*0.5*0.1cm的溃疡面黏膜组织，PBS冲洗，置入4%多聚甲醛固定24h，后置入自动组织脱水机中梯度酒精脱水，二甲苯透明、浸蜡、石蜡包埋。经组织切片、摊片、捞片、烤片后脱蜡至水，苏木精染色、盐酸分化、流水冲洗后酒精脱水，伊红溶液染色。最后梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片，显微镜下观察并拍照。

④酶联免疫吸附法ELISA法检测血清炎性因子（IL-1、IL-8、TNF-a）含量，各项指标都将治疗前及治疗之后进行比较。

分别在给药后3、5、7天，每天取2只大鼠，10%水合氯醛麻醉后，腹主动脉取血，3000r/min离心30min，取上清液，采用ELISA检测血清炎性因子（IL-1、IL-8、TNF-a）含量。

 ⑤ “赵华文百宝丹”对ET-1的影响

口腔溃疡模型建立后，在给药第3、5、7天，抽取外周血和脊髓液，用ELISA法研究ET-1的分泌水平；常规灌注后用免疫组化法观察ET-1在DRG和脊髓背角内的表达变化；制备新的模型，同时用Western blot法确认ET-1在DRG和脊髓背角内的表达变化； 

⑥Western-blot检测MMP-2、MMP-9蛋白的表达

分别在给药后3、5、7天，每天取2只大鼠，收集溃疡组织，4℃PBS中漂洗，除去血液滤纸试干，放入5ml含有匀浆介质的小烧杯内，剪碎组织块，用组织捣碎机以（10000-15000）r/min上下研磨制成10%组织匀浆，将制备好的组织匀浆100mg加入500μL裂解液，4℃持续振荡30min，离心10000r/min，10min后，将上清转入预冷的离心管，考马斯亮蓝测定蛋白浓度，样品以上样缓冲液稀释后煮沸5min使蛋白变性备用，灌制80g/L SDS-PAGE凝胶，取已制备好的蛋白，每孔上样量20μL，150V稳压电场中电泳，约90min后转膜，滤膜经脱脂奶粉封闭过夜，剪膜根据分子量分开后分别加以1：1000稀释的一抗（MMP2、MMP-9）及内参抗体（β-actin，1：3000）室温孵育3h，洗膜3次，以1：3000稀释的HRP标记二抗孵育1h后，洗膜3次，ECL发光液发光后X光片曝光，扫描记录结果，Gel-analyze分析软件分析条带灰度进行半定量比较分析，以目的基因的条带灰度与内参β-actin的灰度比值表示蛋白表达水平。(MMP-2、MMP-9属于明胶酶，主要降解IV型胶原和层黏连蛋白（基底膜的骨架），作为屏障能阻止炎症细胞浸润和炎症扩散。

⑦血小板**实验

依照上述方法采取血样后离心，在20℃的条件下，使用1500 r/min 的转速将血样离心5 min，收集富血小板血浆，取1/2 血浆留样待用，将剩余的富血小板血浆放入离心机中，以 3000 r/min 的转速离心10 min，得到贫血小板血浆； 向富血小板血浆中加入贫血小板血浆，调节血浆浓度，确保各组血样的血浆浓度相同； 将调节好的血浆样本放入37 ℃的恒温孔中预热，逐步加入ADP，最终加入浓度为3μmol/L，促进血小板凝聚制作血小板凝聚样本；使用血小板凝聚分析仪对最终得到的血样进行检测，记录最大凝聚率。

⑧“赵华文百宝丹”对大鼠免疫功能的影响

各组大鼠分别于试验结束后称取体重及脾脏、胸腺重量，脾脏指数=脾脏/体重；胸腺指数=胸腺/体重。

ELISA法测定血清中IgA、IgG含量

治疗结束后，称取各组大鼠重量后摘眼球采血，3500r/min分离血清，4℃冷藏备用，具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行，最后用全自动酶标仪在450mm波长处测定吸光度（OD）值。

2、“赵华文百宝丹”对小鼠痛觉表型的影响

通过以下测试方法测试“赵华文百宝丹”对实验小鼠痛阈值，了解“赵华文百宝丹”对痛觉表型的影响

2.1机械痛的测定

给药前一天用Von Frey法测定基础痛阈，将测痛后的小鼠随机分为5组（空白组，模型组，阳性对照组，高剂量组，低剂量组），连续给药7天，测定给药后1h、2h、3h、4h、6h的痛阈值，同时检测对侧痛阈。

2.2热痛的测定

给药前一天用Hargreaves法测定基础热痛阈，连续给药7天，每次给药后1h测定痛阈变化，同时检测对侧痛阈。

小鼠置于恒温水浴箱的热板上（55℃），以小鼠舔后足潜伏期为痛阈值指标，痛阈5-30s者为合格鼠，给药前测痛2次，间隔10min，取其平均值作为基础痛阈。将测痛后的小鼠随机分为5组（空白组，模型组，阳性对照组，高剂量组，低剂量组），连续给药7天，测定给药后1h、2h、3h、4h、6h的痛阈值，同时检测对侧痛阈。

2.3冷痛的检测

给药前一天用丙酮法（用胰岛素注射器将20 μl的丙酮涂在实验鼠的后足底，然后观察2分钟内的痛反应程度）测定基础冷痛阈，连续给药7天，测定给药后1h、2h、3h、4h、6h的痛阈值，同时检测对侧痛阈。

2.4“赵华文百宝丹”对小鼠甲醛致痛模型镇痛影响

测定小鼠右后肢踝关节处给药前的痛阈值，随机分为空白组、模型组、“赵华文百宝丹”低、高剂量组和阳性对照组。空白对照组不予甲醛，其余小鼠于右后足皮下注入 2.5%甲醛溶液 50μl/只，诱发局部急性炎症。各组连续给药6天。测定小鼠右后肢踝关节处1h、2h、3h、4h、6h的痛阈值。

痛阈压差值=当时痛阈值-给药前痛阈值（初始痛阈值）。

2.5 对小鼠热刺激致痛的影响

小鼠置于恒温水浴箱的热板上（55℃），以小鼠舔后足潜伏期为痛阈值指标，痛阈5-30s者为合格鼠，给药前测痛2次，间隔10min，取其平均值作为基础痛阈。将测痛后的小鼠随机分为5组（方法同上），连续给药7天，末次给药后测定 0.5 h、1 h、1.5 h、2 h 的小鼠痛阈值（算法同上）。

2.6对醋酸诱发小鼠扭体反应的影响

小鼠随机分组给药（方法同上）。各组连续外用给药7 d，末次给药 60 min 后，注射0.7%醋酸溶液，观察记录15 min内小鼠的扭体反应次数，并计算药物对小鼠扭体反应的抑制率。

抑制率=(空白对照组扭体次数-药物组扭体次数)/空白对照组扭体次数3.10 2.7 c-Fos基因检测（免疫组化方法）

测定痛阈值结束后，取动物脊髓切片，将切片脱蜡、水化后，用PBS冲洗；滴加1滴3%过氧化氢以阻断内源性过氧化物酶的活性，室温孵育10min；PBS 冲洗；滴加1滴非免疫性动物血清，室温孵育 20min；去血清，滴加1滴一抗（c-Fos），4℃过夜；PBS 冲洗；滴加1滴生物素标记的二抗，室温孵育 10min；PBS 冲洗，滴加1滴 SABC，室温孵育 20min；PBS 冲洗；滴加2滴新鲜配制的 DAB 溶液，室温下显色，观察 3-10min；蒸馏水充分冲洗，苏木精复染，过梯度酒精脱水干燥，二苯甲透明，中性树胶封固。

2.8疼痛模型制备后，在测定痛阈值结束后，异氟烷麻醉，腹主动脉采血，检测动物血浆中EGF、IL-1、IL-8的含量。

方法同上。

2.9“赵华文百宝丹”对小鼠毛细血管通透性影响

小鼠随机分组（方法同上）。各组小鼠连续外用给药 7d，空白对照组给予生理盐水药膜，末次给药测痛阈后，小鼠尾静脉注射 0.5%伊文思蓝。随后立即腹腔注射 0.6% 醋酸，20 min 后脱臼处死。每只小鼠腹腔用 6 ml 生理盐水冲洗，吸取腹腔液，3000 rpm 离心15 min，取上清液，测定 OD 值（590 nm）。

3.0“赵华文百宝丹”对二甲苯致小鼠耳肿胀模型试验影响

各组小鼠连续外用给药7 d，末次给药 60 min 后，在小鼠左耳廓两面均匀涂抹二甲苯，右耳不涂为正常耳，30 min 后将小鼠脱颈椎处死。沿耳廓边缘剪下左、右两耳，用直径为 6 mm 的打孔器在左右两侧耳相同部位取下圆耳片，立即用分析天平称重，计算耳廓肿胀度。

第四部分:“赵华文百宝丹” 对大鼠急性毒性实验以及安全性评测

20只SD大鼠适应性饲养一周后使用，随机分成二组，实验前禁食12小时，不禁水，给药组给予赵华文百宝丹（按公斤体重计算，以临床用药剂量的50倍为用药剂量），一日连续给药2次，给药间隔时间6小时，对照组给予同体积的生理盐水，给药后观察7天，记录动物的死亡及毒副反应情况。

1、观察“赵华文百宝丹”药物干预后口腔溃疡大鼠体重、皮毛等大体形态学改变；

2、实验结束时，将全部动物处死，解剖。摘取眼球取血，观察“赵华文百宝丹”干预后口腔溃疡大鼠血象及肝功能、肾功能主要生化指标的变化，血常规中血红蛋白、红细胞、白细胞计数的影响；肝功能中丙氨酸转氨酶（ALT）；肾功能中血清尿素氮（BUN）的影响。

3、取肝脏、肾脏、脾脏标本，放入10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片，采用苏木精－伊红染色法（HE染色），光镜下观察“赵华文百宝丹”药物干预后大鼠肝、脾、肾组织组织形态学检查。

七、可行性分析 

1、本项目研究对象临床疗效明确，依据充分，技术可行

“赵华文百宝丹”在临床实践中，得到了临床疗效验证，对口腔溃疡疗效确切，安全性良好，具有较大的研究价值。

A. 高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术

项目合作者本科专业为应用化学，对化合物性能、化合物分离、纯化及鉴定具有较好的基础，硕博阶段在广州中医药大学中药学院中药资源开发与新药研究接收了良好的训练，熟练掌握了LC-MS的使用和维护，能熟练应用LC-MS对样品进行检测、分析，对化合物质谱分析具有熟练的经验，对单体化合物NMR碳谱、氢谱的归属分析具有熟练的经验，且本实验室具备制备色谱，能对药效成分进行鉴定分析。

B. 动物模型构建技术及抗炎镇痛药效评价方法

测痛过程对研究人员熟练程度要求极高，否则误差太大，导致错误结果，项目合作者2018年5月-6月在徐州医科大学麻醉学国家重点实验室经过严格的测痛行为学训练，熟练掌握了Von Frey法、Hargreaves法、丙酮法等各种测痛方法及结果分析手段。

C. 蛋白印迹（WB）、酶联免疫吸附（ELISA）、免疫组化（IHC）技术

团队人员熟练掌握WB、IHC、ELISA等实验方法，熟练掌握了电泳仪、酶标仪、倒置荧光显微镜等仪器的使用，掌握了抗体孵育注意事项，项目合作者在广东省科学院—广东省微生物研究所接收了为期3个月的WB、IHC、实验动物管理及取材等实验方法的学习，在汕头大学医学院接收了为期6个月的IHC实验研究、LC-MS分析研究，能胜任本项目科研需求。

2、工作和实验条件有保障

合作单位对科研经费有成熟的管理体系，对科研经费实施专款专用，积极鼓励支持科研创新，及时跟进科研进展，确保科研工作顺利进行。

合作单位科研设备设施齐全，有本项目相关仪器如岛津液相色谱-质谱联用仪（LC-MS/MS，单四级杆、三重四级杆各1台）、SPF级动物房，动物行为学实验室、测痛系统、细胞房、培养箱、蛋白组学检测系统、凝胶图像分析仪、多功能酶标仪、倒置荧光显微镜、正置荧光显微镜、高速冷冻离心机等实验设施。

八、经费预算

支 出 科 目	金  额 （万元）	计 算 根 据 及 理 由
科研业务费 （业务资料费）	0.8	专家咨询费、文献查阅、资料打印，工作交流
实验材料费 （实验动植物购置）	1	实验动物、中药饮片购买
实验材料费 （动物养殖）	0.2	实验动物饲料、垫料
实验材料费 （抗体、试剂、对照品）	3.8	相关试剂、单体标准品
实验材料费 （包装、运输费）	0.2	包装材料、快递运输费
仪器设备及耗材费 （仪器维护、耗材购置）	2	色谱试剂、样品瓶、过滤头、注射器等， LCMS仪器年度维护费5000元
相关经费 （差旅费）	0.5	差旅费
相关经费 （劳务费）	1.5	研究生劳务费
合计	10	（含汕头大学医学院项目管理费，不含税费）

 

九、预期研究进展

2019/01—2019/5

分析“赵华文百宝丹”组方，通过文献检索，购买对照品，用HPLC、LC-MS对“赵华文百宝丹”的成分进行分析，明确其药效物质基础；

2019/6—2019/12

①建立大鼠口腔溃疡模型，通过计算溃疡表面感染情况、溃疡面积、创面愈合率、HE染色切片观察用药前后炎细胞浸润、坏死组织、癒痕组织形成情况，评价“赵华文百宝丹”的药效作用。

②检测ET-1、TNF-α、IL-1、IL-8等炎性因子；表皮细胞生长因子EGF表达量；MMP-2、MMP-9蛋白的表达；血小板凝集、毛细血管通透性等综合评价“赵华文百宝丹”其解热解毒、化腐生肌作用、通利血脉的作用。

③测定脾脏指数、胸腺指数，以及采用ELISA法测定血清中IgA、IgG含量来评价“赵华文百宝丹”对免疫功能的影响。

④通过建立二甲苯诱导的耳肿胀模型、甲醛法制备急性炎症模型，观察“赵华文百宝丹”用药后抗炎消肿作用。

⑤通过建立热板实验、醋酸扭体实验、甲醛法制备急性疼痛模型，观察“赵华文百宝丹”对小鼠痛觉表型的影响，并通过对应激蛋白c-Fos的检测，评价“赵华文百宝丹”的消炎镇痛作用。

2020/1—2020/6

1、通过观察以下指标对“赵华文百宝丹”安全性进行研究。

①“赵华文百宝丹”药物干预后大鼠体重、皮毛等大体形态学改变；

②血象及肝功能、肾功能主要生化指标的变化，血常规中血红蛋白、红细胞、白细胞计数的影响；肝功能中丙氨酸转氨酶（ALT）；肾功能中血清尿素氮（BUN）的影响。

③HE染色法观察肝、脾、肾组织组织形态学检查。

2、总结实验数据，发表相关论文2-3篇，撰写结题报告，顺利结题。

十、预期成果

1、明确“赵华文百宝丹”发挥药效作用的物质基础。

2、观察“赵华文百宝丹”对大鼠口腔溃疡的药效作用，明确“赵华文百宝丹”清热解毒、收湿健脾、抗炎消肿、通利血脉作用。

3、对“赵华文百宝丹”安全性进行评价。

4、为“赵华文百宝丹”提供临床前药效学研究数据，为其制剂开发及市场化提供可靠科学研究数据。通过科研成果为“赵华文百宝丹”的应用提供依据和指导，提升临床水平和质量。

5、发表相关论文2-3篇。

 

 

 编辑 李顺萍